一种土壤微生物固碳酶提取的方法,其步骤是：A、土壤样品的预处理：a、称取新鲜土样于无菌离心管中；b、加5倍体积预冷的土壤各种离子、无机物以及有机物,胞外游离的蛋白去除剂涡旋混匀,于室温10,000×g离心10分钟,收集沉淀,重复该步骤两次；用于去除减少土壤中各种离子、无机物以及有机物,胞外游离的蛋白；所述的离子为：钙离子、铝离子、镁离子、铁离子、镁离子、钾离子；所述的无机物为：硫酸铝、硫酸镁、硫化亚铁、硫酸锰、碳酸钙、碱金属；所述的有机物为：富理酸、胡敏酸、胡敏素、鼠类、鸟类、水稻、小麦、黑麦草、玉米根系、树木细根和粗根系及水稻、小麦、黑麦草、玉米落叶和树木的落枝；所述的土壤离子去除剂为：50毫摩尔/升的三(羟甲基)氨基甲烷盐酸盐缓冲溶液,20毫摩尔/升的乙二胺四乙酸,100?毫摩尔/升的氯化钠,0.01?克/毫升的聚乙烯吡咯烷酮,pH10.0；c、?加5倍体积预冷的磷酸缓冲液,0.01M,pH?7.4,涡旋混匀,于室温10,000×g离心10分钟,收集沉淀,重复该步骤两次；用于平衡渗透压、维持离子强度和pH7.4；d、加5倍体积的无菌超净水,涡旋混匀,于室温10,000×g离心10分钟,收集沉淀；用于洗涤沉淀并主要去除无机盐离子；e、沉淀通过冷冻干燥后获得无杂质的土样冻干粉,置于?70℃备用。
B、土壤微生物蛋白提取：a、称取2.0克上述预处理后的冷冻干燥样品于10毫升预冷无菌离心管中,加6mL?细胞样品蛋白提取液,涡旋混匀,每个样品3次重复；所述的细胞样品提取液配比为：100毫摩尔/升的三(羟甲基)氨基甲烷盐酸盐缓冲溶液,1毫摩尔/升的二硫苏糖醇,pH?7.8,100微升2.0微克/毫升的蛋白酶抑制剂；b、置于冰浴中用超声波法彻底破碎细胞；20000×g,4℃下离心15分钟,收集上清液,重复离心操作一次,所有的蛋白液均被收集,加入质量比为80%的固体硫酸铵溶解度后,置于4℃振荡充分混匀,20000×g,4℃下离心20分钟,收集析出的蛋白,加50微升的1,5–二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶溶解液溶解后,获得土壤微生物蛋白后,置于0℃保存待用；所述的1,5–二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶溶解液配比为：100毫摩尔/升pH?7.8的三(羟甲基)氨基甲烷盐酸盐缓冲溶液和1毫摩尔/升的的二硫苏糖醇。
C、土壤1,5–二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶酶活性测定：测定前将土壤微生物蛋白提取溶液置于30℃水浴中20~30分钟以恢复酶活性,测定时环境温度保持30℃,每个样品酶活性测定三次,同时做两个阴性对照,分别为无反应底物1,5?二磷酸核酮糖对照和热变性细胞蛋白提取物对照,1,5–二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶活性以二磷酸核酮糖羧化酶的酶活力大小来表示；a、将配制好的反应体系摇匀,倒入比色杯内,以蒸馏水为空白,在紫外分光光度计上340?nm处反应体系的吸光度作为零点值,将50微升1,5–二磷酸核酮糖加于比色杯内,并计时,每隔30秒测一次吸光度,共测3分钟,以计时起到第1分钟内吸光度下降的绝对值计算酶活力；b、不加1,5?二磷酸核酮糖的对照,对照的反应体系与上述酶反应体系完全相同,不同之处只是把酶提取液放在最后加,加后计时并测定此反应体系在340nm处的吸光度,记录前1分钟内吸光度的变化量,计算酶活力时应减去这一变化量；c、二磷酸核酮糖羧化酶的酶活力的计算：nmol?CO2?kg?1(?土壤)?min?1＝ΔA×N×C?/(6.22×2dΔt)式中：ΔA－反应最初1min内340nm处吸光度变化的绝对值；N－稀释倍数；C－换算系数；6.22－每微摩尔的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸在340?nm处的吸光系数；2－每固定1摩尔CO2有2摩尔的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸被氧化；d－比色光程；kg?1－每千克预处理后土样冻干粉；Δt－测定时间为1分钟。
所谓固碳也叫碳封存，指的是增加除大气之外的碳库的碳含量的措施，包括物理固碳和生物固碳。物理固碳是将二氧化碳长期储存在开采过的油气井、煤层和深海里。植物通过光合作用可以将大气中的二氧化碳转化为碳水化合物，并以有机碳的形式固定在植物体内或土壤中。
生物固碳就是利用植物的光合作用，提高生态系统的碳吸收和储存能力，从而减少二氧化碳在大气中的浓度，减缓全球变暖趋势。
固碳，是指增加除大气之外的碳库碳含量的措施。包括物理固碳和生物固碳。物理固碳是将二氧化碳长期储存在开采过的油气井、煤层和深海里。生物固碳是将无机碳即大气中的二氧化碳转化为有机碳即碳水化合物，固定在植物体内或土壤中。
常见的固碳方法有两种：
光合作用：如各种绿色植物和光合自养微生物（如蓝藻等）；
化能合成作用：如硝化细菌利用氧化氨合成有机物等。
生物固碳提高了生态系统的碳吸收和储存能力，减少了二氧化碳在大气中的浓度。
